前言

GB 5009.35-2023食品中合成著色劑的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)將于2024-03-06起實(shí)施，本次標(biāo)準(zhǔn)修訂在現(xiàn)有檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，擴(kuò)充了能夠檢測(cè)的食品基質(zhì)類型和著色劑種類，覆蓋了GB 2760-2014中規(guī)定的11種合成著色劑（分別為檸檬黃、新紅、菜紅、藍(lán)、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、唾咻黃、赤蘚紅和酸性紅），以及允許添加的所有基質(zhì)大類中的25種典型基質(zhì)。同時(shí)前處理方法也由聚酰胺粉變更為WAX混合型弱陰離子交換反相吸附或等效固相萃取柱。

本實(shí)驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.35-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》，使用EZsep™WAX固相萃取柱凈化樣品，再通過E.T.氮吹濃縮儀濃縮，高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，建立了肉制品中合成著色劑的分析方法。

1、實(shí)驗(yàn)過程

1.1 儀器與試劑

LC-20AD液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中國）有限公司；

MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置，貨號(hào)：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司；

EZsep™WAX固相萃取柱（150mg/6mL），貨號(hào)：PZ12103，北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

甲酸，氨水，無水乙醇，乙酸銨，等化學(xué)品均為分析純或以上，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

水中11種色素混標(biāo)，100μg/mL，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

取色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，用水稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10μg/mL的色素混標(biāo)中間液。

移取10μg/mL的色素混標(biāo)中間液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mL，分別用水稀釋至1.0mL容量瓶中，得到濃度依次為0.2、0.5、1、2、5、10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

準(zhǔn)確稱取試樣2.0g，置于50mL具塞離心管中，先加入20mL石油醚,渦旋1min，超聲提取10min，10000r/min離心5min，棄去上清液，加入25mL乙醇氨水溶液，50℃超聲提取20min，10000r/min離心10min，取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入約5mL乙醇氨水溶液重復(fù)提取操作四次，離心后合并上清液于50mL容量瓶中，用乙醇氨水溶液定容至刻度即得提取液。準(zhǔn)確吸取提取液10mL，50℃氮?dú)鉂饪s至3mL左右，分3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，作為待凈化液，待凈化。

將EZsep™WAX固相萃取柱（150mg/6mL，貨號(hào)：PZ12103）依次用6mL甲醇、6mL水活化后，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后再依次用6mL2%甲酸水溶液、6mL甲醇淋洗固相萃取柱，之后用氮?dú)獯蹈奢腿≈?min，以6mL 2%氨化甲醇溶液洗脫并收集洗脫液，經(jīng)E.T.氮吹濃縮儀在50℃下氮?dú)鉂饪s至近干，再加0.2mL甲醇，用0.02mol/L乙酸銨稀釋至2.0 mL，渦旋1min，PTFE微孔濾膜過濾，高效液相色譜測(cè)定。

1.4 LC分析

色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）

流動(dòng)相：A：0.02mol/L乙酸銨溶液 B：甲醇；

流速：1.0mL/min

檢測(cè)波長：415nm、520nm、610nm

進(jìn)樣量：10μL

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

2、       實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

圖1 1.0μg/mL混標(biāo)色譜圖

圖2 樣品加標(biāo)色譜圖

圖3 空白樣品色譜圖

3、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用EZsep™WAX固相萃取柱（150 mg/6mL，貨號(hào)：PZ12103，北京萊伯帕茲檢測(cè)科技有限公司）對(duì)肉制品中合成著色劑進(jìn)行凈化后測(cè)定，該方法的加標(biāo)回收率在62.2%~95.0%之間，RSD在0.5%~3.9%之間。準(zhǔn)確性和精密度均滿足GB 5009.35-2023要求，且實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定、可靠。

4、參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.35-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定