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EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氫大麻酚代謝物并以GC-MS定量

更新時(shí)間:2022-07-11       點(diǎn)擊次數(shù):3065
 摘要:

在(-)-11-nor-9-羧基-9-四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)的氣相色譜-質(zhì)譜分析中,評(píng)估了EmporeTM固相萃取柱(4215SD-C18的樣品制備。固相萃取柱性能由測(cè)定的回收率決定。回收率范圍在78.7-110.1%。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時(shí),相關(guān)系數(shù)R2=0.9998

 

關(guān)鍵詞:

四氫大麻酚THCCOOH,外標(biāo)法,GC-MS 

 

 

前言

美國(guó)CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技術(shù),以其有機(jī)溶劑消耗、結(jié)果重現(xiàn)性高、樣品制備的通量高、提取物更清潔可減少 GC 系統(tǒng)的污染以及自動(dòng)化提取等優(yōu)勢(shì)[1],廣泛應(yīng)用于藥物檢測(cè)領(lǐng)域[2,3]。本實(shí)驗(yàn)使用美國(guó)CDS公司膜式固相萃取柱(EmporeTM4215SD-C18提取尿液中△9-四氫大麻酚(THC,大麻)代謝物(-)11-nor-9-羧基-9-四氫大麻酚 (THCCOOH),并以GC-MS分析定量

1, 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑 

所有試劑均為分析純或更高。

THCCOOH(100.0±0.6 μg/mL)和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化試劑,均購(gòu)自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司

人工尿液(PH:5.7-500mL),購(gòu)自福州飛凈生物科技有限公司;

乙酸乙酯(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司

甲醇(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司

正己烷(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司

EmporeTM 膜式固相萃取柱:4215SD-C18,購(gòu)自美國(guó)CDS公司;

氣質(zhì)聯(lián)用儀:7890B-5977B安捷倫氣質(zhì)聯(lián)用儀,Agilent公司。 

1.2 工作液配制 

THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用溶液:0.1 μg/mL,溶劑體系為甲醇;

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

取12個(gè)15mL離心,分別裝入3mL尿液樣品,加入不同體積的THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用液(加標(biāo)量分別3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng),每個(gè)標(biāo)點(diǎn)進(jìn)行平行兩次制備。然后加入300μL氫氧化鉀溶液(10mol/L),在60水浴環(huán)境下水解15min取出冷卻至室溫,再以冰醋酸調(diào)節(jié)pH到4.0~4.5。

EmporeTM固相萃取柱(C18, 7mm/3mL)預(yù)先用150μL甲醇進(jìn)行活化,后進(jìn)行上樣(在重力作用下使樣品自然流下),上樣結(jié)束后用750μL甲醇-水溶液(5050)淋洗萃取柱,在690mmHg真空狀態(tài)下干燥5min,最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液(7525)進(jìn)行洗脫。

1.3.2 凈化與濃縮

洗脫液經(jīng)40氮吹至干,然后加入100μL衍生試劑(MSTFA+1%TMCS),在60℃水浴條件下衍生20min,轉(zhuǎn)移至樣品瓶待 GC-MS分析

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)配制

取6個(gè)20mL樣品瓶,分別加入不同體積THCCOOH標(biāo)準(zhǔn)使用溶液,加入THCCOOH質(zhì)量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng,參照與加標(biāo)樣品制備同等濃縮、衍生條件進(jìn)行前處理,待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

進(jìn)樣口溫度:290;進(jìn)樣模式:不分流進(jìn)樣;流速:1.0mL/min;

柱溫:100保持1min,然后以30/min的速度升至300,保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性離子

化合物

定量、定性離子

保留時(shí)間(min)

THCCOOH

371/473/488

12.158

 

2, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果(外標(biāo)法) 

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)第一個(gè)點(diǎn)(3ng)信噪比較低,難以準(zhǔn)確積分。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)第五個(gè)點(diǎn)(150ng)結(jié)果明顯偏低,為實(shí)驗(yàn)操作衍生化失誤引進(jìn)誤差。 

 

 圖1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)校準(zhǔn)點(diǎn)重疊色譜圖

 

圖2
 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

 

3結(jié)果與討論

本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18),對(duì)尿液中四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)進(jìn)行富集提取的簡(jiǎn)單有效方法。實(shí)驗(yàn)中,尿液加標(biāo)樣品經(jīng)水解、固相萃取凈化、濃縮以及衍生等前處理步驟后,經(jīng)GC-MS分析得到不同濃度下四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)加標(biāo)回收率,回收率范圍在78.7-110.1%,結(jié)果較好。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)濃度范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時(shí),相關(guān)系數(shù)R2=0.9998,具有較好線(xiàn)性。實(shí)驗(yàn)表明,CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18)適用于尿液中四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)的萃取凈化。該方法具有操作簡(jiǎn)便,線(xiàn)性范圍寬,穩(wěn)定性高等優(yōu)點(diǎn),并在尿液量少,分析物濃度較低時(shí)顯示出優(yōu)異的回收率

 

4,參考文獻(xiàn)

1,Jasbir Singh and Linda JohnsonSolid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MSJournal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997

2,R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-9-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)

 

 

3 不同濃度加標(biāo)樣品重疊色譜圖

 

2  加標(biāo)回收率結(jié)果

序號(hào)

加標(biāo)

回收率 %

均值 %

ng

1

2

1

15

82.2

96.4

89.3

2

30

101.8

109.4

105.6

3

60

89.2

78.7

83.9

4

150

93.1

101.3

97.2

5

300

91.4

110.1

100.7

注:因3ng標(biāo)點(diǎn)信噪比偏低,在此不做數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

 

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